SARS非典病毒(SARS)熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱:SARS 病毒(SARS)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name :Diagnostic Kit for SARS-coV RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規(guī)格】48份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測的咽拭子標(biāo)本等標(biāo)本中 SARS 病毒 RNA,適用于 SARS病毒感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對 SARS 病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對 SARS 病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)
本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1樣本前處理
取 100uL 拭子標(biāo)本于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取
法),請按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反
應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次,有效期 12 個月。
【標(biāo)本采集】
采集病人的咽拭子標(biāo)本,應(yīng)使用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部
位,應(yīng)避免觸及舌部;迅速將拭子放入標(biāo)本采集管中,旋緊管蓋并密封,以防干燥。
4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇:
檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿
選擇 ROX 參比熒光。
5. 結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲
線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;
可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
6. 檢測方法的局限性
1)樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
2)樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
3)陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
4)病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
5)不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
6)試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;
7)本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;
以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。
8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率
為 100%。
低檢測限:5.0×102copies/ml。
精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。
【注意事項】
1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。
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